医疗机构的医疗器械、工作台面常会受到血液的污染，若消毒处理不当则极易造成疾病的医源性传播。加强对消毒后医疗器械、工作台面的HBsAg监测是控制其造成医源性传播的措施之一。因消毒处理后的器械、台面即使有HBV的污染，其HBsAg的量也会极低，加之采样液的稀释，可能使采样液中的HBsAg量远低于ELISA法的检测灵敏度，从而出现假阴性结果。本次模拟现场实验样本，用聚丙烯酰胺凝胶浓缩后检测HBsAg，取得了满意结果，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 聚丙烯酰胺凝胶(浓缩剂)制备 24%单体母液(丙烯酰胺22.8g、双甲掌丙烯酰胺1.2g加水100ml搅拌溶解)15ml加0.02MTris缓冲液(NaCl1.17g、Tris0.24g、EDTA-Na20.07g加水100ml搅拌溶解)15ml，然后加10%TEMED液125μl充分混匀后加入10%过硫酸铵液(须新鲜配制)375μl，迅速混匀后倒入干净的搪瓷盘内，约30分钟聚合凝固。用刀片切成0.5×1cm小块，置去离子水中漂洗数次，放37℃温箱自然干燥成聚丙烯酰胺凝胶颗粒。密闭避光保存备用。
1.2 模拟现场实验样本制备 将HBsAg阳性血清用0.03MPBS作1∶4倍比稀释，制成不同浓度的样本液后分别均匀涂布实验台面，待其自然干燥后，用浸有生理盐水的棉�米油磕ㄉ鲜鍪笛樘�100cm2，投入含4ml生理盐水的试管中。在涡旋混匀器上震荡30秒，以充分洗下吸附在棉拭子上的HB sAg。弃棉拭子后平均分装两管，制成双份平行样，每份2ml。共制备120份双份平行样本。
1.3 模拟现场实验样本浓缩 取双份平行样中的一份放入聚丙烯酰胺凝胶颗粒，待凝胶颗粒充分吸收样本中水分后冷藏备检，此样本为浓缩样本。双份平行样中的另一份为未浓缩样本。
1.4 HBsAg检测 用ELISA法同时检测浓缩样本及未浓缩样本。检测试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供，效期内使用，严格按试剂使用说明书操作、判读结果。
2 结果
2.1 浓缩和未浓缩样本HBsAg阳性率比较 120份未浓缩样本检出HBsAg阳性14份，阳性率11.7%，120份浓缩样本检出阳性38份，阳性率31.7%，两者间有显著性差异(P<0.01)。
2.2 阳性样本检测结果平均OD值比较 浓缩样本、未浓缩样本HBsAg均阳性的14份样本，检测结果用Reader230s酶标仪读取OD值，分别计算平均OD值。未浓缩样本平均OD值为0.232，浓缩样本为0.975，两者间有显著性差异(P<0 01)。
3 讨论实验结果表明，聚丙烯酰胺凝胶浓缩样本不仅可以提高HBsAg检出阳性率，而且可以提高HBsAg阳性样本检测结果的OD值，更加有利于实验结果的判断。该法适用于因受采样液稀释从而导致HB sAg含量降低的样本检测，如医疗机构工作台面、医疗器械采样液HBsAg的监测。ELISA法检测HBsAg虽然具有灵敏度高、特异性强的优点，但其灵敏度亦有一定限制，如国产试剂的灵敏度一般为1.0～3.2ng/ml。而0.1ng/ml的HBsAg即具有传染性，用常规ELISA法检测医疗机构相关样本的HBsAg有漏检传染性样本的可能。用聚丙烯酰胺凝胶法浓缩样本后检测HB sAg可以减少这种可能的发生，对控制疾病的医源性传播具有一定的流行病学意义。聚丙烯酰胺凝胶浓缩样本时仅吸收样品中的水分，对样本中的抗原、抗体无吸附、破坏作用。故认为本法除可用于HBsAg的浓缩检测外，尚可用于其他抗原、抗体(如尿液中HIV-Ab)的浓缩检测。
聚丙烯酰胺凝胶法浓缩标本检测HBsAg的结果分析
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