聚丙烯酰胺凝胶的快速考马斯蓝染色和脱色方法

中图分类号：R446 文献标识码：B 文章编号：1671-7414(2004)03-055-01　聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质是一项常用的分析技术，它常以考马斯蓝、甲醇和乙酸作为染色和脱色剂，传统的染色和脱色时间分别为3～6h和10～48h。
本文介绍一种快速的高温染色和漂洗脱色的方法，该法简便、快速、经济、有效。染色和脱色时间均可缩短至0.5～1.0h。具体方法：蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，将凝胶放于含有100～250ml染色液(1.25mg/L考马斯蓝)甲醇∶乙酸∶水(50∶10∶40)溶液的塑料盒中染色，盖紧盒盖后，置55℃水浴30min，不时用手摇动。
染色完毕后，将凝胶用蒸馏水短暂冲洗，然后放于200～300ml2.5%(v/v)的漂白液(5.25g/dl次氯酸钠)中，在摇床中以60r/min的速度于室温脱色30～60min。脱色时应不时观察脱色情况，当可见大多数蛋白带时应立即倒掉漂白液，凝胶用自来水彻底冲洗后，再用500ml自来水漂洗3次，每次10min，新方法与传统方法相比，两者灵敏度相当，但新方法本底更为清晰。