1 引 言双水相体系是一种优越的萃取方法，具有高效、高选择性、高生物适应性、良好的可调控性及易与其它分析仪器联用等特点；双水相体系不使用挥发性有机溶剂，无毒、安全，是一种绿色萃取技术。近年来双水相体系分离分析技术主要应用于生物活性物质及细胞颗粒的分离与纯化[1，2]。Fang等用10%TritonX 100 盐 水体系从中草药中萃取Ginsenoside，比常规用甲醇等有机溶剂更快而且回收率更高。Li等对药物萃取中分相盐选择原则和成相机理给予新的解释，并从分子光谱变化解释了萃取药物机理。对于双水相体系而言，如何较好的选择分配条件来控制分配及分配机理都有待更深入的研究。采用聚乙二醇(PEG，M=1500)与聚乙烯吡咯烷酮(PVP，M=30000)组合表面活性剂 (NH4)2SO4 H2O双水相体系萃取水杨酸和洛美沙星，两种药物的萃取率分别为102%和69.0%。按所采用的方法形成双水相体系，无需使用振荡器，操作简便，方法重现性好，可方便地进行连续萃取。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂RF 5301PC分子荧光光度计(日本岛津公司)；UV 2102紫外可见分光光度计(上海尤尼柯公司)；PHS 3C型精密酸度计(上海)；Cintra10紫外可见分光光度计(澳大利亚GBC公司)。聚乙二醇(PEG1500，汕头光华试剂厂)：50%水溶液；聚乙烯吡咯烷酮(PVP30000，上海化学试剂公司)：30%水溶液；水杨酸(APC，化学对照品)；洛美沙星(LFXC，化学对照品)：1.0g/L储备液；0.40mol/LBritton Robin son(B.R.)缓冲溶液；二次去离子水；其余试剂均为AR。
2.2 实验方法按成相方法及文献实验方法，荧光光谱以150W氙灯为光源，入射和出射狭缝均为1.5nm；1cm样品池，在药物最大荧光激发波长和发射波长条件下(λex/λem)，分别测定IE(萃取至PVP PEG相中)药物的荧光强度和IP(加入至PVP PEG相中)药物的荧光强度；分别算出相应CE/CP，得到药物的萃取率E。APC在0～10mg/L，LFXC在0～4mg/L范围内符合Beer定律。工作曲线线性相关系数分别为0.9986和0.9959(n=5)。
3 结果与讨论
3.1 PEG PVP (NH4)2SO4 H2O双水相体系分相条件的选择3.1.1 PEG与PVP的体积比及pH对成相的影响 当VPEG+VPVP=4.00mL时，随VPEG∶VPVP值不断增大，分相后相比R=VH2O/VPEG PVP逐渐增大。考虑分相后相比R大小适中，粘度适中，便于操作，又要使样品富集倍数较大，故选择VPEG∶VPVP=1∶1为宜。在pH2～6范围内，VPEG PVP∶VH2O保持不变，可知pH对分相条件并无影响。pH=6.0B.R.缓冲溶液，其组合表面活性剂相和盐水相缓冲效果最佳。
3.1.2 (NH4)2SO4用量对双水相体系成相的影响 图1表明，当VPEG=2.00mL，VPVP=2.00mL，pH=6 0B.R.缓冲溶液2.00mL时，分相盐(NH4)2SO4选择为1.5g。在pH=6.0B.R.缓冲溶液条件下，实验了总体积4.00mL的不同比例的PEG400、PEG600、PEG1000、PEG1500与PVP30000溶液分相所需的盐量，实验表明：随着PVP所占比例越大，PEG分子量越大，分相所需最小盐量逐渐减小。
3.2 药物在组合表面活性剂PEG1500 PVP30000 (NH4)2SO4 H2O双水相体系中的分配行为
3.2.1 药物浓度对萃取率的影响 按照实验中得到萃取后的荧光强度，从标准工作曲线查得相应的CE，以CE/CP计算萃取率E。由表1可知，EAPC>ELFXC、APC和LFXC的萃取率随着药物浓度的改变并未发生明显变化，即在pH、PEG PVP浓度和加入(NH4)2SO4的量均保持不变时，在实验浓度范围内，药物在该双水相体系中的分配只取决于药物自身性质和PEG PVP相的性质和温度，与药物浓�任薰亍�
3.2.2 pH对萃取率的影响 由表2可知，APC在pH2～6范围内，LFXC在pH3～5范围内的萃取率不大，pH=6.0时，APC与LFXC二者萃取率相差最大且分相效果最佳，可作为分离pH条件。
3.2.3 测定药物的分配系数KD 参照文献，测定了在pH=6.0时，APC和LFXC随浓度变化的KD。在1～10mg/L范围内KDAPC的平均值为105.6(n=5，RSD=1.7%)，在1～4mg/L范围内KDAPC的平均值为4.95(n=4，RSD=5.1%)。结果表明：在不同浓度条件下，KDAPC>KDLFXC；KDLFXC、KDAPC在一定的浓度范围内KD基本为一常数。
3.3 PEG PVP (NH4)2SO4 H2O双水相体系萃取APC和LFXC的机理APC、LFXC具有许多易形成氢键的位点，可以将其视为氢键型药物，而且LFXC形成氢键能力较APC强。从APC、LFXC在组合表面活性剂相和水相中的紫外光谱(见图2)及分子荧光光谱(见图3)可以看出：LFXC在有机相中的紫外光谱产生红移和增敏现象，这是由于LFXC与组合表面活性剂PEG PVP之间形成分子间氢键所致。APC的紫外光谱变化不大的原因是，在pH=6.0的弱酸性条件下，APC分子中邻位OH和COOH易形成分子间氢键，因而与PEG PVP形成分子间氢键能力小。APC和LFXC在有机相中的荧光光谱表明：它们在PEG PVP溶液中的荧光强度均高于水溶液中的荧光强度；这一现象也说明药物与组合表面活性剂PEG PVP之间形成分子间氢键，使分子的刚性增强，荧光质点被分散和联结于混合胶束中，从而使荧光强度增强。组合表面活性剂 盐 水双水相萃取药物的机理是基于组合表面活性剂与药物形成氢键和疏水相互作用力的共同作用的结果。药物形成氢键作用力大，疏水作用力小，越易保留在水相中。在表面活性剂相的萃取率和分配系数小；若药物形成氢键作用力小，疏水作用力大，越易保留在表面活性剂相中。在表面活性剂相的萃取率和分配系数大。
组合表面活性剂 盐 水双水相体系萃取水杨酸和洛美沙星
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