HPLC测定双黄连口服液中黄芩苷的含量 (pdf)
【摘要】 目的 采用HPLC法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量。方法 采用十八烷基键合硅胶为固定相；甲醇∶水∶冰乙酸(60∶50∶1)为流动相；流速1.0ml/min；检测波长274nm。结果 黄芩苷在25～220μg范围内呈良好线性(r=0.9995)；平均回收率100.59%，RSD为1.02%(n=9)。结论 本法快速准确，杂质分离完好，重现性好，可用于该制剂中黄芩苷的含量测定。
【关键词】 高效液相色谱法；黄芩苷；双黄连口服液
双黄连口服液处方中含金银花、黄芩和连翘，具有辛凉解表、清热解毒之功效，用于治疗外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛之症状。中国药典［1］采用HPLC法测定双黄连口服液中黄芩苷含量作为控制制剂质量的指标，结果样品黄芩苷峰与杂质峰无法完全分离(图1)。本文通过改变流动相比例测定，结果分离效果好，快速准确，重现性好，可用于本制剂的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器 美国SSI Ⅳ型液相泵，M525紫外检测器，Anastar色谱工作站；赛多利斯BP-211D电子天平。
1.2 试药 黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号200512)；双黄连口服液(哈高科白天鹅药业集团有限公司，批号05117-1；江苏吴中实业股份有限公司苏州长征制药厂，批号050114；中国黑龙江完达山制药，批号050301)；甲醇(色谱纯)、冰乙酸(AR)，重蒸水。
图1 药典流动相样品的HPLC色谱图2 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18柱(5μm，250mm×4.6mm)；流动相：甲醇：水：冰乙醇(60：50：1)；流速1.0ml/min；检测波长274nm，柱温40℃。
3 试验方法和结果
3.1 对照品液的制备 精密称取黄芩苷对照品20.60mg，置200ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2 标准曲线 精密吸取上述对照品溶液0.25ml，0.50ml，0.75ml，1.00ml，1.25ml，1.50ml，1.75ml，2.00ml，置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度。进样20μl，记录色谱图(图2)。以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制回归方程：Y=6535.7X+9508(r=0.9995)，结果黄芩苷在25～220μg范围内呈良好的线性关系。
图2 改进流动相后对照品的HPLC色谱图
3.3 精密度试验 分别精密进对照品溶液20μl，重复进样6次，按上述色谱条件记录峰面积，结果RSD%=0.89%。
3.4 样品分离度 按样品测定法制备供试液进样20μl，记录色谱图(图3)，结果峰与相邻杂质峰分离完全，分离度≥2.5。
3.5 重现性试验 取同一批样品(05117-1)，按样品测定法制备供试液，在上述色谱条件下进行5次平行测定，结果RSD=1.56%，表明本法测定的重现性好。
3.6 稳定性试验 取批号05117-1的供试品溶液，分别在制备后0，2，4，8，12h测定，结果黄芩苷的峰面积RSD=1.82%，表明溶液基本稳定。
3.7 阴性干扰实验 取阴性对照样品(按《中国药典》2000版一部缺黄芩苷制剂)，精密进阴性对照品溶液20μl，按上述色谱条件记录色谱图(图3)。结果黄芩苷对照品相应无干扰峰出现，说明处方中其他成分对测定结果无干扰。
图3 改进流动相后阴性对照的HPLC色谱图
3.8 回收率试验 采用加样回收法。精密量取已知含量的样品1ml，置50ml量瓶中，分别精密加入浓度为10.30mg/ml；黄芩苷对照品溶液1ml，2ml，3ml，加50%甲醇稀释至刻度。进样20μl，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率试验结果
3.9 样品测定 精密量取各样品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20min，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用45μm液膜过滤，滤液即为供试品溶液，在上述色谱条件下，进样20μl，记录峰面积(图4)，计算黄芩苷含量，结果见表2。
图4 改进流动相后样品的HPLC色谱图表2 双黄连口服液含量测定结果
4 讨论
本法测定双黄连口服液的黄芩苷的含量，操作简单易行，以甲醇：水：冰乙酸(60：50：1)为流动相，样品中黄芩苷与杂质峰完全分离，出峰时间短，峰形稳定，进样量在20～220μg范围内呈良好线性，回收率高且稳定，可以选定上述色谱条件的流动相，作为该制剂黄芩苷的含量测定。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典.北京：化学工业出版社，2000，418-419.
2 周玉新.中药指纹图谱研究技术.北京：化学工业出版社，2002，8.
